产品简介:
本公司生产的SDS-PAGE凝胶制备试剂盒是按照经典方法配制而成。本试剂盒提供了配制SDS-PAGE凝胶所需的各种试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制PAGE胶。本试剂盒可配制不同规格、不同聚合度的PAGE胶(即聚丙烯酰胺凝胶) 约25/50块。
注意事项:
1. PAGE胶促凝剂和10%PAGE胶凝固剂最后加,在加入前需混匀前面所加试剂。10%PAGE胶凝固剂溶液在4℃有效期为一周; PAGE胶促凝剂易挥发,使用后请盖紧瓶盖。在常温下胶30分钟内可以凝固,如温度过低,可放37℃温箱凝固。灌完分离胶后,轻轻的加1mL ddH2O封上层,胶凝固后可见到分界线。灌浓缩胶前,先倾去水层,再用吸水纸吸干。浓缩胶灌好后立刻插入梳子。浓缩胶凝固后,放入电泳液中(让电泳液漫过加样孔),轻轻的拨出梳子,可防加样孔变形。
2. 配制量可按上表等比加减。如果所用胶浓度与上面不同,可自行调整,主要是调整30% 制胶液的量(需要浓度×总体积/30%),最后用水补足总体积。
配胶说明:
1. 先在PAGE胶凝固剂干粉中加入蒸馏水或去离子水(每克PAGE胶凝固剂需加水10mL)配置成10%溶液,将溶液分装成小体积后冻存于-20℃,制备凝胶时融化后使用。4℃保存有效期为一周。检测SDS溶液是否澄清,若出现絮状物或沉淀可放37℃片刻至溶解,不影响效果。
2. 根据目标蛋白分子量大小,选取凝胶浓度,按下表配制。先配分离胶,再配浓缩胶。
总体积
|
10mL
|
10mL
|
10mL
|
10mL
|
5mL
|
30% 制胶液(29:1)
|
5mL
|
4mL
|
3.3mL
|
2.7mL
|
0.83mL
|
1M Tris-HCl (PH6.8)
|
0
|
0
|
0
|
0
|
0.625mL
|
1.5M Tris-HCl(PH8.8)
|
2.5mL
|
2.5mL
|
2.5mL
|
2.5mL
|
0
|
10%SDS
|
100μL
|
100μL
|
100μL
|
100μL
|
50μL
|
10%PAGE胶凝固剂
|
100μL
|
100μL
|
100μL
|
100μL
|
75μL
|
PAGE胶促凝剂
|
10μL
|
10μL
|
10μL
|
10μL
|
7.5μL
|
ddH2O
|
2.3mL
|
3.3mL
|
4.0mL
|
4.6mL
|
3.42mL
|
最佳分离范围
|
10-40kD
|
12-60 kD
|
20-80 kD
|
30-90kD
|
—
|